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ELISA實驗原理、ELISA類型及適用場景
更新時間:2025-09-15瀏覽:40次

  ELISA實驗原理

  ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)是一種基于抗原-抗體特異性結(jié)合的免疫檢測技術(shù),通過酶催化底物顯色實現(xiàn)定性或定量分析?。其核心原理包括:

  固相包被?:抗原或抗體通過物理吸附固定在微孔板表面?。

  免疫反應(yīng)?:待測樣本與包被物結(jié)合,形成抗原-抗體復(fù)合物?。

  信號放大?:酶標(biāo)記的二抗或底物催化顯色,通過酶標(biāo)儀讀取吸光度值?。

  主要ELISA類型及適用場景

  類型? ?          原理特點(diǎn)?                                   典型應(yīng)用?

  直接ELISA?  抗原直接包被,酶標(biāo)一抗檢測    病毒顆粒、純化蛋白定量?

  間接ELISA?  酶標(biāo)二抗放大信號,靈敏度高    抗體檢測(如HIV、新冠IgG/IgM)?

  夾心ELISA?  雙抗體夾心結(jié)構(gòu),特異性強(qiáng)       胞因子(IL-6)、腫瘤標(biāo)志物(CEA)?

  競爭ELISA?  標(biāo)記抗原與樣本抗原競爭結(jié)合抗體 小分子檢測(激素、藥物)?

  關(guān)鍵試劑與儀器

  試劑?:

  包被緩沖液?(如碳酸鹽緩沖液)?

  酶標(biāo)抗體?(HRP或AP標(biāo)記)?

  顯色底物?(TMB或OPD)?

  終止液?(如硫酸)?

  儀器?:

  酶標(biāo)儀(檢測吸光度)?

  移液器(精確加樣)?

  洗板機(jī)(去除未結(jié)合物)?

  操作步驟(以夾心ELISA為例)

  包被?:捕獲抗體固定于微孔板,4℃過夜?。

  封閉?:加入BSA或脫脂牛奶封閉非特異性位點(diǎn)?。

  孵育?:加入樣本和檢測抗體,37℃孵育1小時?。

  顯色?:加入TMB底物,避光反應(yīng)15分鐘?。

  終止?:加入終止液,酶標(biāo)儀讀取450nm吸光度?。

  注意事項

  樣本處理?:避免反復(fù)凍融,離心去除顆粒物?。

  洗滌?:每次孵育后需洗滌,減少背景信號?。

  標(biāo)準(zhǔn)曲線?:需設(shè)置梯度濃度標(biāo)準(zhǔn)品,確保線性范圍?。


試劑盒常見問題及解決方案.png


  注:以上資料僅供參考,具體產(chǎn)品信息請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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